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問(wèn)君幾多愁,恰似一支氨基柱超難留!

更新時(shí)間:2019-07-08 點(diǎn)擊次數(shù):4911

 

當(dāng)您使用氨基柱時(shí),有沒有遇到在使用一段時(shí)間之后,柱效下降、柱壓升高,使得檢測(cè)結(jié)果逐漸達(dá)不到要求?或者柱子在使用過(guò)程中出現(xiàn)異常干擾峰,或者保留時(shí)間出現(xiàn)漂移,與之前的檢測(cè)結(jié)果有較大偏差?又或者是柱子的專一選擇性,使得在特定色譜條件下方法得不到重現(xiàn),分離度、柱效和拖尾因子達(dá)不到檢測(cè)要求?由于氨基柱的*性,進(jìn)而使用問(wèn)題較多,這給我們帶來(lái)了很多的困擾,那么今天就來(lái)談?wù)劙被?/span>

氨基柱的鍵合官能團(tuán)是氨丙基,這種官能團(tuán)比常規(guī)的C18、C8和C4易水解,所以在使用氨基柱之前,我們就要做好心理準(zhǔn)備,氨基柱的使用壽命比常規(guī)色譜柱要短很多。

 

氨基柱既可以做正相,也可以反相使用,而這兩相溶劑是不能互溶的,所以如果在正反相進(jìn)行切換使用時(shí),需要用異丙醇進(jìn)行過(guò)渡。下面將分別談?wù)劙被谡磧上嘀械氖褂门c維護(hù)注意事項(xiàng)。

 

反 相

?反相使用時(shí),如果流動(dòng)相不含有酸堿鹽,做樣結(jié)束直接用100%的乙腈進(jìn)行沖洗和保存即可。若含有酸堿鹽,首先用60%的乙腈水沖洗40min,然后再用100%的乙腈沖洗和保存;

?反相使用時(shí),注意流動(dòng)相的pH范圍,pH越低越容易水解,理想的pH范圍是3-7,流動(dòng)相中水的比例越高,也越容易水解。

PS:柱子使用后,沖洗后建議保存在純的有機(jī)相中,這樣能獲得良好的保存效果以及延長(zhǎng)柱子的使用壽命。此外如柱子出現(xiàn)了柱壓升高,峰形異常,柱效和分離度下降等異常情況后,可以先用過(guò)渡流動(dòng)相沖掉色譜柱的鹽,再分別以做樣流速用100%乙腈→100%甲醇→100%異丙醇→100%乙腈進(jìn)行沖洗,每項(xiàng)沖洗30分鐘,其中異丙醇由于黏度大,所以需要降低流速。

 

正 相

柱子的沖洗使用100%的正己烷,然后使用正己烷/異丙醇(90/10)進(jìn)行保存。

此外,正相色譜中,固定相的水分含量是影響選擇性的關(guān)鍵參數(shù),而流動(dòng)相存在的水分含量會(huì)影響到保留時(shí)間和分離度,所以出現(xiàn)保留時(shí)間波動(dòng)較大,可以歸因于固定相和流動(dòng)相中水分的變化,建議對(duì)氨基柱進(jìn)行除水:

?去除固定相中的水分:

用含2.5%二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30倍柱體積;

?使用水分含量可控的流動(dòng)相(比如水半飽和):

半飽和流動(dòng)相配置:將無(wú)水的非極性流動(dòng)相分成兩半,其中一半中加入一定量水,并混勻攪拌約1小時(shí),靜止分層后,將多余的水相全部除去,將兩部分重新混合在一起就配成了“半飽和”流動(dòng)相。

PS:如果出現(xiàn)柱壓升高、分離度和柱效下降等異常情況,建議用100%異丙醇→100%甲醇→100%異丙醇以分析流速分別沖洗,每項(xiàng)沖洗40分鐘。同樣,異丙醇沖洗時(shí)需降低流速。

 

乳糖專用柱

月旭還有一款特殊氨基柱,乳糖專用柱 Xtimate®Lactose-NH2,我們建議采用純乙腈進(jìn)行沖洗和保存,如果柱壓升高,分離度和柱效下降等異常情況,可以用純甲醇→純乙腈→純異丙醇→純乙腈分別進(jìn)行沖洗,每項(xiàng)3小時(shí)。

 

在使用乳糖專用柱檢測(cè)時(shí),如果出現(xiàn)噪音增加、漂移增大、分離度達(dá)不到或者柱效不夠等異常情況,需要注意以下幾點(diǎn):

?流動(dòng)相混合在一起,充分搖勻,真空抽濾,超聲脫氣10分鐘,使用一個(gè)通道運(yùn)行,不要使用在線過(guò)濾器;

?進(jìn)樣體積需要嚴(yán)格按照藥典要求,進(jìn)樣10μL,盡可能地將定量環(huán)更換成10μL定量環(huán),減小柱外死體積的影響,下面左圖和右圖分別是進(jìn)樣20μL和進(jìn)樣量10μL的色譜圖,對(duì)比非常明顯;

      

?由于示差檢測(cè)器對(duì)溫度的變化比較敏感,建議將柱溫箱用干毛巾或者干的棉花填充,充當(dāng)傳熱介質(zhì),使得有更好的基線噪音和色譜效果。

 

由于氨基鍵合官能團(tuán)*的極性,易水解,導(dǎo)致氨基柱的使用壽命較其它常規(guī)色譜柱要短,所以我們需要認(rèn)清這個(gè)事實(shí)。希望以上的使用和維護(hù)方法可以幫到您,極大地延長(zhǎng)氨基柱的壽命。

 

 

 

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