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陰離子色譜柱洗脫和保留特性的變化規(guī)律

更新時間:2018-08-06 點擊次數(shù):4874
陰離子色譜柱是一款氫氧根陰離子交換色譜柱,能快速梯度分離各種樣品中常見無機陰離子,該柱子關(guān)鍵的應(yīng)用是檢測高純水中常見無機陰離子。該色譜柱具有較低的硫酸根空白,基線能快速平衡來分析痕量的陰離子。
 
陰離子色譜柱洗脫:
1、洗脫液的選擇:
(1)保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。
(2)要使結(jié)合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。
(3)梯度范圍盡量小一些,以提高分辨率。
 
2、洗脫方式:離子交換色譜一般采用梯度洗脫,通常有改變離子強度和改變pH值兩種洗脫方式。
(1)改變離子強度的洗脫:在洗脫過程中逐步增大離子強度,從而使與離子交換劑結(jié)合的各個組分被洗脫下來。
(2)改變pH值的洗脫:陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫,陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。由于pH值可能對蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響,一般采用改變離子強度進(jìn)行洗脫。
 
3、洗脫速度:洗脫液的流速會影響離子交換分離效果,洗脫速度通常要保持恒定。一般來說,洗脫速度慢比快的分辨率要好,但過慢會造成分離時間長、樣品擴散、譜峰變寬和分辨率降低等。
如果洗脫峰相對集中于某個區(qū)域造成重疊,應(yīng)適當(dāng)縮小梯度范圍或降低洗脫速度來提高分辨率。如果分辨率較好,但洗脫峰過寬,可適當(dāng)提高洗脫速度。
 
陰離子色譜柱保留特性的變化規(guī)律及應(yīng)對措施
在離子交換色譜中,存在著3種電離平衡,分別是樣品組分的電離平衡、流動相中緩沖溶液的電離平衡、柱上離子交換基團的電離平衡。
陰離子色譜柱保留行為的變化、流動相組成的調(diào)整,會綜合影響到上述的電離平衡,這種影響較為復(fù)雜,并不是一致的。如提高流動相的pH值,會促進(jìn)流動相的電離,增加流動相的洗脫強度,減小樣品組分的保留;pH值的增加同時又會促進(jìn)樣品的電離,增加樣品組分的保留,同時還會抑制陰離子色譜柱上硅烷銨鹽的電離,減小樣品組分的保留。

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